乳糖酶是由前乳糖酶原经过一系列步骤生成的：前乳糖酶原由4个部分组成，即氨基末端的信号肽域、胞外域、疏水的跨膜锚定区、羧基末端的胞内段，在信号肽引导下经过内质网一系列修饰后进入高尔基体后被O糖基化，然后经历细胞内和肠腔的2次裂解形成成熟的乳糖酶。