园长助理和副园长的主要区别是：园长助理没有固定工作职责，而副园长是有规定的工作职责范围。这是因为园长助理是协助园长工作的，必须在园长授权情况下，才能行使工作权利。而副园长有自己的工作职责，在工作中可随时正常行使工作职权。