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瑞特染液是一种常用的细胞染色剂,用于血细胞和疟原虫染色。以下是瑞特染液的基本配制和使用方法:
配制瑞特染液
材料准备
瑞氏染料(亚甲蓝和伊红)
甲醇(AR)
甘油(可选)
步骤
将干燥的瑞氏染料放入乳钵中,轻轻敲碎成粉末状。
加入少量甘油或甲醇研磨,直至染料在乳缸内呈现“一面镜”光泽,无染料粉粒沉着。
再加入较多量甲醇继续研磨,直至乳钵内染料及甲醇用完为止。
将上层液体倒入清洁储存瓶中,并重复上述步骤,直至染料完全转移至储存瓶。
摇匀后密封瓶口,室温下避光保存,储存时间越长,染料溶解和分解越好,一般建议储存3个月以上。
使用瑞特染液
固定细胞
将血膜固定在载玻片上。
染色过程
加瑞特染液,静置一段时间(通常为几分钟至十几分钟)。
加等量缓冲液冲洗,待干。
注意事项
新鲜配制的瑞特染色剂偏碱性,需在室温或37℃下贮存一定时间,待美蓝逐渐转变为天青B后才能使用。
染色对氢离子浓度敏感,pH值的改变可影响染色效果。
使用优质甲醇,稀释染色时需用缓冲液,冲洗用水应接近中性。
结果解释
血红蛋白、嗜酸性颗粒等阳离子物质与伊红结合,染成橘红色。
核蛋白、嗜碱性颗粒等阴离子物质与亚甲蓝结合,染成蓝灰色。
中性颗粒与伊红和亚甲蓝均可结合,染成淡紫色。
储存与成熟
贮存时必须塞严,防止甲醇挥发和氧化。
加入甘油可防止甲醇挥发,同时使血细胞染色更清晰。
以上是瑞特染液的基本配制和使用方法。